- Tráviaca metóda na diagnostiku sarkocystózy
– zo svaloviny z oblasti pažeráka, jazyka, srdca, bráničných pilierov alebo kostrovej svaloviny odoberieme vzorky na vyšetrenie o hmotnosti 15 g
– vzorky nastriháme na malé kúsky a zmixujeme so 40 ml tráviaceho roztoku*, trypsinácia prebieha za stáleho miešania na elektromagnetickej miešačke bez ohrevu po dobu 30 minút
– po natrávení vzorku precedíme cez plastové sitko do 4 centrifugačných skúmaviek
– centrifugácia robíme pri 1000 ot./min. po dobu 5 minút.
– po odstránení supernatantu sediment zo 4 skúmaviek spojíme do jednej, premiešame a opäť centrifugujeme pri 1000 ot./min. po dobu 2 minút.
– vzniknutý supernatant opäť zlejeme a 2-3 kvapky sedimentu pipetou prenesieme na podložné sklíčko, zakryjeme krycím sklíčkom a vyšetríme pod mikroskopom.
*Príprava tráviaceho roztoku:
- roztok: Na2HPO4 . 12 H2O (53,72 g/l) hydrofosforečnan sodný
- roztok: K2HPO4 (20,38 g/l) hydrofosforečnan draselný
2 ml roztoku 1. a 8 ml roztoku roztoku 2. pridáme do 990 ml destilovanej H2O a pH upravíme na 7,38. V 80 ml takto pripraveného pufru rozpustíme 50 mg trypsínu.
Pozn.: roztok s trypsínom pripravujeme vždy čerstvý!
2. Tráviaca metóda na diagnostiku trichinelózy
Na vyšetrenie trichinelózy odoberieme vzorku z kostrovej svaloviny zvieraťa (bránica, jazyk, žuvač, predlaktie) o hmotnosti 1-5 g, v závislosti od druhu zvieraťa.
Presný postup pre vyšetrovanie mäsa určeného na ľudský konzum stanovuje Nariadenie Komisie (ES) č. 2075/2005 z 5.12.2005, ktorým sa ustanovujú osobitné predpisy na úradné kontroly Trichinella spp. v mäse, príloha I., kapitola I. metóda magnetického miešania pri trávení súhrnných vzoriek.
– vzorku zhomogenizujeme a prenesieme do kadičky a zalejeme 100-násobným objemom tráviacej tekutiny obsahujúcej 1 l vody, 10 ml 37 % HCl, 10 g pepsínu 10.000 I.U.
– proces trávenia prebieha za stáleho miešania na elektromagnetickej miešačke, na vyhrievanej platni alebo v termostate, pri teplote 46-48 °C, po dobu 30 minút až 3 hodín, v závislosti od druhu vyšetrovaného zvieraťa, až do momentu úplného vytrávenia svaloviny.
– tráveninu následne prefiltrujeme cez sito s veľkosťou ôk 180 µm do separačného lievika a necháme sedimentovať po dobu 30 minút.
– supernatant odsajeme a k sedimentu pridáme vodu do pôvodného objemu a necháme sedimentovať ešte 20 minút. Premývanie vzoriek sa niekoľko krát opakuje.
– výsledný sediment vyšetrujeme na mriežkovanej Petriho miske pod mikroskopom pri zväčšení 15-40x.