Sérologické metódy

Sérologické metódy na diagnostiku parazitov využívame najmä vtedy, ak ich nie je možné dokázať inými metódami. Na sérologické vyšetrenie odoberáme venóznu krv do sterilnej skúmavky, ktorá neobsahuje žiadne konzervačné prísady ani antikoagulanty. Po vyzrážaní krvi a následnom odstránení krvného koláča pomocou centrifúgy získame krvné sérum, ktoré následne použijeme pri vybranom sérologickom teste.

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)

  • Je najpoužívanejšou imunologickou metódou na detekciu protilátok alebo antigénov. V prvom kroku dochádza k naviazaniu antigénu na pevný povrch mikrotitračnej doštičky. Následne sa pridáva testované sérum, protilátka proti druhovo špecifickým imunoglobulínom konjugovaná s enzýmom (konjugát) a nakoniec substrát reagujúci s enzýmom za vzniku farebnej reakcie. Po každom kroku sa doštičky premývajú, aby sa zbavili zvyškov nenaviazaných látok. Ak sú v sére protilátky prítomné, reakcia sa prejaví zmenou zafarbenia reakčnej zmesi. Výsledky sa vyhodnocujú spektrofotometricky, prípadne vizuálne.

Test nepriamej imunoflurescencie (IFAT)

  • Táto metóda je založená reakcii antigénu s protilátkou, pričom je detegovaný špecifický konjugát – komplex flurochrómu FITC (izotiokyanátu fluoresceínu) s protilátkou proti hľadanej protilátke. Konjugát sa pripravuje z hyperimúnneho séra zvierat (morča, králik, imunizovaných pomerne čistým, opakovane podávaným antigénom. Metóda je senzitívna a vysokošpecifická, avšak relatívne náročná na laboratórne vybavenie (fluorescenčný mikroskop). Nevýhodou je tiež subjektívne zhodnotenie výsledkov.

Komplement fixačný test (CFT)

  • CFT je založený na väzbe komplementu s komplexom antigén-protilátka. Pre výsledok reakcie je rozhodujúca hemolýza baraních erytrocytov v indikátorovom hemolytickom systéme. V prítomnosti špecifickej protilátky dochádza za spolupôsobenia komplementu k jej väzbe s antigénom. Testovaný imúnny systém spotrebuje komplement (čerstvo odobraté morčacie sérum) a v konkurenčnom indikátorovom systéme nedôjde k hemolýze. CFT sa používa pri diagnostike vybraných protozoárnych nákaz (toxoplazmóza, lieshmaniózy, trypanozómy a iné) a helmintóz (trichinelózy, filariózy a iné)

Nepriamy hemaglutinačný test (IHT)

Princíp tohto testu spočíva v zhlukovaní erytrocytov senzibilizovaných antigénom za prítomnosti imúnneho séra. Vyšetrované sérum sa riedi geometrickým radom od 1:10. Do séra pridáme suspenziu senzibilizovaných erytrocytov a inkubujeme vo vodnom kúpeli pri 37 °C. Následne odčítame výsledky. Ak dôjde ku aglutinácii, výsledok sa hodnotí podľa veľkosti zhlukov na pozitívny (+), stredne pozitívny (++), alebo silne pozitívny (+++). Táto metóda je určená najmä na skríningové analýzy, je pomerne rýchla a finančne nenáročná.